品才网>生物/化工/环保/能源>生物素亲和素

生物素亲和素

时间：2022-06-20 16:52:33 生物/化工/环保/能源我要投稿

相关推荐

生物素亲和素3篇

　　生物素亲和素篇一：生物素标记蛋白操作方法

生物素亲和素3篇

　　下面的操作方法可以使约3－5分子的生物素与1分子的蛋白结合，对某些蛋白来说，生物素与蛋白的分子比可根据不同的生物素化要求进行调整。

　　1、溶解2－10mg蛋白于1ml的BuphTm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰

　　当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算：蛋白质量（mg）/蛋白分子量（MW）＝蛋白质的毫摩尔数。

　　2、在打开之前，平衡生物素至室温。加2mgSulfo-NHS-Biotin于100ul超纯水中，加入足够量浓度的

　　生物素，一般对于10mg/ml蛋白来说超过12倍分子数，对于2mg/ml蛋白溶液应超过20倍，或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中。（见下表）

　　3、室温30分钟，或冰上放置2小时。

　　4、用30mlPBS预洗纯化柱，上样，加入与欲收集量相同的缓冲液，收集0.5ml或1ml于单独的管中。5、以280nm的吸收值测定蛋白含量。

　　6、生物素化的蛋白4℃存放至使用，可加入叠氮钠、甘油等保存。

　　HABA法检测生物素标记效果

　　试剂配制：①PBS（100mM磷酸盐，150mMNaclPH7.2）

　　②HABA/亲和素溶液：10mg亲和素、600ul10mMHABA于19.4ml的PBS中，该溶液的A500

　　大约在0.9-1.3之间，溶液于4℃保存可稳定2周。如果有沉淀形成（HABA溶液）可过滤后使用。

　　比色法检测生物素/蛋白质摩尔质量比：

　　1、吸取900ulHABA/亲和素溶液于1ml比色杯。

　　2、测定该溶液在500nm处的吸收值并记录为“A500HABA/Avidin”。3、吸取100ul生物素标记的蛋白于杯中并测定500nm的吸光度值，记为A500HABA/Avidin/Biotin(数

　　值必须恒定15s以上)如果A500HABA/Avidin/Biotin的值不超过（≤）0.3，重新稀释待测样品并检测。

　　注：计算结果时必须考虑稀释度。4、计算Biotin/Protein摩尔比

　　①A=生物素化的蛋白毫摩尔浓度＝蛋白浓度（mg/ml）/蛋白的分子量②B=500nm处的吸光度变化

　　△A500=（0.9×A500HABA/Avidin）-A500HABA/Avidin/Biotin

　　③C=生物素的毫摩尔浓度=mmolBiotin/ml反应溶液=△A500/（34,000×光程）④Biotin/Protein摩尔比=C·10·稀释倍数/A

　　生物素亲和素篇二：生物素-亲和素系统(BA5)放大作用的机制主要是

　　一、整体解读

　　试卷紧扣教材和考试说明，从考生熟悉的基础知识入手，多角度、多层次地考查了学生的数学理性思维能力及对数学本质的理解能力，立足基础，先易后难，难易适中，强调应用，不偏不怪，达到了“考基础、考能力、考素质”的目标。试卷所涉及的知识内容都在考试大纲的范围内，几乎覆盖了高中所学知识的全部重要内容，体现了“重点知识重点考查”的原则。

　　1．回归教材，注重基础

　　试卷遵循了考查基础知识为主体的原则，尤其是考试说明中的大部分知识点均有涉及，其中应用题与抗战胜利70周年为背景，把爱国主义教育渗透到试题当中，使学生感受到了数学的育才价值，所有这些题目的设计都回归教材和中学教学实际，操作性强。

　　2．适当设置题目难度与区分度

　　选择题第12题和填空题第16题以及解答题的第21题，都是综合性问题，难度较大，学生不仅要有较强的分析问题和解决问题的能力，以及扎实深厚的数学基本功，而且还要掌握必须的数学思想与方法，否则在有限的时间内，很难完成。

　　3．布局合理，考查全面，着重数学方法和数学思想的考察

　　在选择题，填空题，解答题和三选一问题中，试卷均对高中数学中的重点内容进行了反复考查。包括函数，三角函数，数列、立体几何、概率统计、解析几何、导数等几大版块问题。这些问题都是以知识为载体，立意于能力，让数学思想方法和数学思维方式贯穿于整个试题的解答过程之中。

　　生物素亲和素篇三：生物素-亲和素系统放大作用的主要机制是

　　一、整体解读

　　1．回归教材，注重基础

　　2．适当设置题目难度与区分度

　　3．布局合理，考查全面，着重数学方法和数学思想的考察

【生物素亲和素】相关文章：